Фотченковой А.С. Диагностика ВЛК/ВИК

Здесь вы можете обратится за первичной консультацией терапевта
Ответить
Аватара пользователя
vikidm
Сообщения: 509
Зарегистрирован: 02 фев 2011, 15:07

Фотченковой А.С. Диагностика ВЛК/ВИК

Сообщение vikidm »

Здравствуйте, уважаемая Александра Сергеевна.

Снова много вопросов по диагностики ВЛК и ВИК.
За последние пять лет слишком увеличилось количество кошек положительных по ВЛК/ВИК, и домашних, и бывшеУличных ок. 1:10 – это только кто тестировался!.

Очень странно, может быть причина в несовершенстве диагностики?!!
Сейчас врачи как Правило рекомендуют сдать ДВА анализа разными способами (ИХ,Элиза и ПЦР) и в разных Лабораториях. Но очень часто эти анализы оказываются противоположными.

ВОПРОСЫ (если можно ответьте, пожалуйста, по пунктам):
1. Методы ПЦР, ПЦР РНК, ИХ, Элиза – кому из них можно доверять на 90-100%?
В Европе предпочитают «быстрые» тесты, почему? ПЦР РНК- что за ноу-хау? Это надёжно?

2. Лаборатории Шанс, Звенигородка, Зайцев+ - кому из них, или ещё, можно доверять?

3. Если точно кошка имеет Влк/Вик можно ли её прививать? (Знаю, что кастрировать/стерилить можно).

4. Александра Сергеевна, я видела на ВетМедикале что 26 июня Вы читали Лекцию «Диагностика ВИК и ВЛК, особенности ведения пациентов,
в том числе клинически здоровых».

Можно где-то ознакомиться с ней?

Лекция Марка ПАКА тоже очень интересно.

Заранее благодарю за ответы. Виктория

------------------------------------------------------------------------------------------------------------
П.С. От результата анализа порой зависит судьба кошки….найдёт ли она дом?!! И здоровье Владельца!

Моя знакомая была у Вас не приёме…Домашняя кошка, ежегодно вакцинируется Компл+от лейкоза Пуревакс (т.к. выезжает на дачу). Врач вдруг предложил ей сдать на ВЛК (были вопросы по ОКА), она получила в Зайцев+ ПЦР РНК положительно, а тест в Шансе ИХ – отрицательно. Хозяйка кошки теперь не может спокойно спать, есть, работать, отдыхать……Просто ужас и стресс, выжидает время, чтобы пересдать тесты…..
Последний раз редактировалось vikidm 14 июл 2017, 12:39, всего редактировалось 1 раз.
Аватара пользователя
Фотченкова Александра
Сообщения: 3568
Зарегистрирован: 30 мар 2012, 13:58

Re: Фотченковой А.С. Диагностика ВЛК/ВИК

Сообщение Фотченкова Александра »

Здравствуйте.
1. Ни один метод не может быть точным на 100%, тем более что специфичность и чувствительность лабораторий и техники выполнения их (особенно пцр) в Москве мы не можем проверить методами золотого стандарта, потому как их нет в России (выделение вируса).
По иностранным данным чувствительность и специфичность ИХА = Ч/С Элиса
Чувствительность и специфичность даже иностранных ПЦР лабораторий тоже варьирует от 40 до 100% по приведенным данным в литературе. Что у нас, кто знает...
2. Ответ на этот вопрос сам по себе в первом пункте) Кто знает...
3. Кастрировать и стерилизовать нужно точно.
Вакцинация не рекомендована, если кошка не гуляет. Любым носителям ВЛК/ВИК рекомендуется сидеть дома! Это очень важно... даже важнее всяких профилактических исследований, вакцинаций, "терапии"... Тогда их не стоит прививать.
Если все же владельцы отказываются содержать кошку строго дома или обстоятельства складываются так, что это никак невозможно, реокмендуют выпускать питомцев на улицу только днем, а на ночь держать в доме, это снижает частоту контактов между кошками на улице + рекомендуют проводить вакцинацию против бешенства раз в год (но есть данные что при ВЛК она может оказаться вообще неэффективной), от калицивируса, ИРТ и панлейкоепнии каждый год или каждые 6 месяцев (в этом вопросе нет единого мнения).
Стоит использовать убитые вакцины, если это возможно (у нас это мультифел и феловакс). Если таких нет - можно и комплексные с аттенуированными компонентами.
4. На ветмедикале есть запись.

Диагностика влк и вик сложна не только у нас, но и за границей, тем не менее. Зачастую мы получаем результаты, с которыми сложно ответить на вопрос о носительстве этих инфекций однозначно, особенно про ВЛК. Очень важно оценивать риски заражения животного (могла ли кошка заразиться вообще, от кого и когда это было) и возраст при оценке анализов.
Аватара пользователя
vikidm
Сообщения: 509
Зарегистрирован: 02 фев 2011, 15:07

Re: Фотченковой А.С. Диагностика ВЛК/ВИК

Сообщение vikidm »

Ваша пациентка кошка вислоушка Ева (Елена), которая получила у Рахманиной НА ПЦР-РНК на ВЛК положительно в Зайце+
пересдала в двух лабах, двумя способами получила отрицательно!
ЧЕРЕЗ МЕСЯЦ- повторили в двух лабах двумя способами- отрицательно!!!!!

Значит- ПЦР-РНК не правдоподобен!!!!
Аватара пользователя
Фотченкова Александра
Сообщения: 3568
Зарегистрирован: 30 мар 2012, 13:58

Re: Фотченковой А.С. Диагностика ВЛК/ВИК

Сообщение Фотченкова Александра »

Да, мы уже списались.
Скорее всего прошлый результат был ошибочен и кошка здорова)
Есть низкая вероятность, что все же контакт с инфекцией был и Ева ее поборола. Однако, это маловероятно, учитывая анамнез.
Аватара пользователя
vikidm
Сообщения: 509
Зарегистрирован: 02 фев 2011, 15:07

Re: Фотченковой А.С. Диагностика ВЛК/ВИК

Сообщение vikidm »

Александра Сергеевна каким Методом диагностики ВЛК/ВИК сейчас пользуетесь Вы в БК ?
- Неужели нужно ещё сдать РНК слюны и крови?
- Если "отриц. РНК ни о чем не говорит", зачем его сдавать? может сразу ПЦР-ДНК или Элиза??????
- Почему РНК ловит вирус ВЛК вакцинированного от Лейкоза животного ???
---------
Отвечают Лаборатории:

Обнаружение в крови кошки ПЦР-РНК Вирусного лейкоза кошек, говорит о том, что в организме животного есть этот вирус и в данный момент выделяется в окружающую среду (т.е. животное является источником заражения для других животных).
Обнаружение в крови кошки ПЦР-про- ДНК Вирусного лейкоза кошек, говорит о том, что в крови животного есть этот вирус и животное может быть как носителем этого вируса, так и выделять вирус в окружающую среду.
Если ПЦР-РНК Вирусного лейкоза кошек, не обнаружен в крови, то это не говорит об отсутствии вируса в организме, говорит только о том, что в данный момент кошка не выделяет вирус лейкоза в окружающую среду.
С уважением,
Екатерина Лаврова,
зав. ОМД и ИФА
Лаборатория "Шанс Био"

Данный анализ будет доступен к заказу осенью этого года.

С уважением,
Кинкладзе М.Д.
директор по качетсву
Лаборатория "Шанс Био"
-----------------------------------
Для наиболее достоверной диагностики вирусной лейкемии кошек лучше всего использовать метод ПЦР, т.к. он наиболее чувствительный.

Но необходимо подходить комплексно, т.е. определять провирусную ДНК в крови, РНК в крови и РНК в слюне.

С уважением,
Зайцев+
Последний раз редактировалось vikidm 16 авг 2017, 14:26, всего редактировалось 4 раза.
Аватара пользователя
Фотченкова Александра
Сообщения: 3568
Зарегистрирован: 30 мар 2012, 13:58

Re: Фотченковой А.С. Диагностика ВЛК/ВИК

Сообщение Фотченкова Александра »

1. Достоверность результатов анализов слюны, слезы на влк стоит под большим вопросом по результатом проведенных исследований специфичности и чувствительность нескольких таких тест систем, поэтому этот анализ не рекомендован вовсе. Когда сделают нормальный тест, опубликуют и проверят - тогда его станут использовать.
2. Не знаю зачем, я не сдаю.
3. Я не знаю, ловит ли он рнк вируса или нет. ДЛя этого нужно провести вакцинацию кошек именно этой вакциной и провести им серию пцр рнк исследований в течение какого-то периода, чтобы ответить на вопрос, может ли вакцинацию давать такой результат тест. С контрольной группой. При чем именно этой лаборатории. Никто этого не делал.. Поэтому остается только гадать.
В теории это могло бы давать положительный результат, но это не значит, что так есть на практике. Пишут, что результат ELISA у привитых кошек отрицательный.

Для диагностики я использую разные варианты в зависимости от пациента и вероятности наличия у него влк вовсе. Я стараюсь отправлять анализы в разные лаборатории, чтобы определить для себя лучший вариант. Однако, пока эти попытки также противоречивы..
Многое зависит вообще от анамнеза и вероятности заболеть инфекцией, от других признаков, а не от лаборатории.
Известно, что результаты иммуноферментных тестов (у нас ветэксперт используется как экспресс скрининг) коррелируют с результатами высокоспецифичных и чувствительных ELISA анализов (тоже можно сдать в МСК в нескольких лабораториях), есть исследования, что это так. Поэтому я им доверяю, меня они устраивают как скрининг. Однако при необходимости подтвердить диагноз, что бывает тоже часто, я сдаю ELISA и пцр в другие лабы.

Кошка с ПЦР + может быть незаразна, если у нее регрессивная инфекция.
Кошка с + ИФА И ELISA скорее всего заразна, так как имеет много вируса, обнаруживаемого таким методом. Но перейдя в регрессию она становится незаразной.
Такие данные об этом)
Отрицательный пцр точно не говорит о том, что кошка не выделяет вирус. ПЦР может быть ложноотрицательным запросто. ВЛК и ВИК очень часто мутирующие вирусы, которые анализ может не обнаружить просто из-за изменения последовательности генов вируса вследствие мутаций, которые с ними происходят только так)
Являются ли РНК ПЦР + кошки заразными или незаразными я не знаю. Нет нигде таких данных, не знаю, откуда такие выводы) Кровь заразна, если анализ не ложный. Положительный анализ на рнк вируса же не говорит о том, что инфекция поразила слюнные железы и вирус выделился со слюной и кошка заразна? Он просто нашел вирус и все.
Аватара пользователя
vikidm
Сообщения: 509
Зарегистрирован: 02 фев 2011, 15:07

Re: Фотченковой А.С. Диагностика ВЛК/ВИК

Сообщение vikidm »

Вот ещё хорошая статья

http://rostovvet.ru/lethal-infection-of-cats/


1.6 Диагностика
1.6.1. Прямые методы обнаружения
[CENTER]
[/CENTER]
1.6.1.1. ИФА (p27)
Первые ИФА тесты, основанные на поликлональных антителах, позволяли количественно определять вирусный белок p27, но имели тенденцию давать ложно-положительные результаты, так как антитела обнаруживали не только вирусные белки, но иногда и не вирусные компоненты [Lutz и др. др., 1980b;.. Lutz и др., 1980c]. Улучшенные тесты были построены на основе твердофазного ИФА и были высокоспецифичны. Однако подтвержденное наличие вирусных белков не означало виремию. Современные ИФА тесты имеют высокую диагностическую чувствительность и специфичность, но нуждаются в подтверждении «золотым стандартом» в диагностике лейкоза. Таким стандартом является ПЦР диагностика на наличие провирусной ДНК. Исследования показали, что диагностическая чувствительность ИФА составляет примерно 90%. То есть примерно 10% кошек оказались позитивными в ПЦР и дали отрицательный результат в ИФА, что говорит об отсутствии антигенемии. Специфичность ПЦР близка к 100%, поскольку каждый позитивный ИФА тест подтвердился в ПЦР (Hofmann et al., 2001). Таким образом, ПЦР обладает диагностической чувствительностью более чем 90%, а специфичность составляет более 98% [Hartmann et al., 2001].
1.6.1.2. Иммунная хроматография
Эти тесты основаны на том же принципе, что и ИФА. Диагностическая чувствительность и специфичность таких экспресс тестов сопоставимы с ИФА [Hartmann et al., 2007; Hartmann et al., 2001; Pinches et al., 2007; Robinson et al., 1998].
1.6.1.3. Иммунофлуоресцентный анализ
Первый метод, который позволил обнаруживать вирус в полевых условиях, был непрямой иммунофлуоресцентный анализ (РНИФ), разработанный в 1973 г. [Hardy и соавт., 1973]. Он был основан на наблюдении, что гранулоциты, лимфоциты и тромбоциты у инфицированных кошек содержат вирусные компоненты, которые могут быть обнаружены с помощью реакции непрямой иммунофлюоресценции в мазках крови. Диагностическая чувствительность метода по сравнению с выявлением вируса в ПЦР значительно ниже, но положительный результат, как правило, говорит о стойкой виремии [Hawks et al., 1991]. Если у кошки наблюдается лейкопения или инфицирован небольшой процент лейкоцитов периферической крови, наличие инфекции может остаться незамеченным.
1.6.1.4. Культивирование вируса
Выделение вируса в культуре клеток считалось высшим критерием определения болезни. [Jarrett 1980; Jarrett et al., 1982]. Действительно, на ранней стадии инфекции, выявление инфекционных частиц часто является наиболее чувствительным методом (Lehmann и соавт., 1991). С учетом сложной логистики, этот тест уже не используется для рутинных исследований.
1.6.1.5. ПЦР для обнаружения провируса (ДНК)
Так как каждая клетка кошки содержит от 12 до 15 копий генетического материала эндогенных вирусов FeLV, оказалось довольно трудно определить последовательности, специфичные для экзогенного провируса [Jackson et al., 1996]. Значение метода ПЦР в значительной степени возросло с появлением ПЦР в реальном времени, которая позволяет проводить количественный анализ провируса [Hofmann-Lehmann et al., 2001]. ПЦР анализ имеет самую высокую аналитическую и диагностическую чувствительностью с учетом того, что все лабораторные исследования выполняются в соответствии со всеми требованиями и в надлежащих условиях.
Проведение ПЦР для выявления провируса может быть полезным у кошек с отрицательным иммунохроматографическим тестом.
1.6.1.6. ПЦР для обнаружения вирусной РНК
Выявление вирусной РНК стало новым аспектом в диагностике лейкоза [Tandon et al., 2005]. С помощью этого теста возможно обнаружить и провести количественный анализ вирусной РНК в цельной крови, сыворотке, плазме, слюне или фекалиях. Выявление РНК в ПЦР не дает ту же информацию, что и определение ДНК провируса. Достаточно много кошек, иммунная система которых преодолела виремию, но, тем не менее, они будут положительными на наличие провируса. У таких животных РНК вируса не будет определяться в крови, слюне и фекалиях [Gomes-Keller et al., 2006a]. Обнаружение вирусной РНК является надежным показателем вирусемии.
В большинстве случаев ПЦР анализ проводится индивидуально. Тем не менее, в определенных условиях, когда стоимость анализа высока, например, для тотального тестирования кошек в питомнике, можно использовать ПЦР для исследования объединенных проб, так как тест достаточно чувствителен для выявления одной инфицированной кошки в 30-ти объединенных пробах [Gomes-Keller et al., 2006b].
1.6.2. Косвенные методы обнаружения
Несмотря на то, что возможно определять антитела к вирусу FeLV, результаты такого анализа трудно интерпретировать, так как много кошек имеют антитела к эндогенному вирусу. Поэтому такие тесты в настоящее время не имеют клинического значения.
Есть тесты на вирус нейтрализующие антитела, но они не получили широкого распространения (в основном, используются в Великобритании).
1.6.3. Интерпретация результатов исследований
Первый тест, который будет положительным практически сразу после заражения, это выделение вируса на культуре клеток. Спустя нескольких дней после заражения для диагностики возможно использовать ПЦР для выявления ДНК и РНК, а затем ИФА [Hofmann-Lehmann et al 2006]. Кошки с устойчивой виремией, как правило, дают положительный результат по всем тестам.
Наиболее широко используемые тесты для диагностики инфекции FeLV на практике – это иммунохроматографические экспресс тесты для определения антигена. Распространение лейкоза кошек постепенно сокращается, однако во многих европейских странах существует тенденция к увеличению ложно положительных результатов. Поэтому сомнительный и положительный результат у здоровой кошки должен быть всегда подтвержден, желательно с использованием ПЦР. Положительный результат у кошки с клиническими признаками инфекции является более надежным, поскольку у таких животных распространение вируса, вероятно, будет значительно выше.
Кошки с положительным результатом могут преодолеть виремию в течение 2-16 недель, в редких случаях дольше. Поэтому каждая положительно реагирующая кошка без клинических признаков должна быть изолирована и через несколько недель или месяцев исследована повторно.
Кошки, у которых вируса нет в крови, дадут отрицательные результаты в ИФА, иммунохроматографии и в ПЦР при определении РНК, однако будут позитивными при выявлении провируса [Gomes- Keller et al., 2006a]. Таких кошки следует считать латентно инфицированными, хотя клиническая значимость в большинстве случаев будет низкой. Тем не менее, в редких случаях, хронический стресс, подавление иммунной системы или ко-инфекции могут привести к реактивации вируса. Средняя нагрузка провируса у кошек, преодолевших виремию в несколько сотен раз ниже, чем у кошек с устойчивой виремией. Небольшая часть кошек (2-3%) все же остаются положительными в ИФА и иммунохроматографии. У этих животных очаги инфекции находятся за пределами костного мозга. Такие кошки должны рассматриваться в качестве потенциального источника инфекции [Lutz и др.., 1980c].
Таким образом, первоначально кошек можно проверить иммунохроматографией на наличие вирусного белка р27. Если результат окажется отрицательным по любой причине, тест необходимо повторить в квалифицированной лаборатории, используя альтернативный формат – ПЦР для выявления провируса.
Последний раз редактировалось vikidm 26 сен 2017, 14:43, всего редактировалось 1 раз.
Ответить